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Suspension cell (pro-B cell line)을 이용한 실험을 하고 있는 대학원생입니다.
suspension cell의 최대 약점이 바로 transfection이 어렵다는 점입니다.
별의별 transfection reagent를 사용하여도 transfection efficiency는 극악이었습니다.
그나마 가장 efficiency가 좋은 방법은 바로 "electroporation" 입니다.
(efficiency가 좋은 대신, cell damage가 상당하므로 장단점이 극명한 방법입니다)
Digital Bio (현재는 Invitrogen과 합병이 되었습니다)사의 기계를 이용하여 electroporation을 하고 있습니다.
Invitrogen에서 판매하고 있는 electroporation용 buffer의 취약점은 따로 구매를 하기 어렵다는 점입니다.
buffer를 다쓰게 되면 Set구매를 해야하므로 경제적인 부담감이 만만치 않습니다.
buffer를 다 사용하고 재구매를 고려하던 차에
Mirus사의 Ingenio electroporation Kits & solution을 소개받고, 사용하게 되었습니다.
위의 사진은 GFP를 electroporation을 한 후 찍은 사진들 입니다.
실험 방법은 기존 protocol과 동일하게 진행하였습니다.
PBS에 비하여 월등히 electroporation efficiency가 높은 것은 물론이고,
cell viability, electroporation 후의 cell damage 또한 월등하게 차이가 났습니다.
(두번째 사진들을 보시면 PBS로 실험한 쪽이 매우 지저분하게 cell debris가 많은것을 볼 수 있습니다)
이번 실험에 Invitrogen사의 buffer는 사용하지 않았지만, 오랜 실험 경험상 Invitrogen에서 판매하고 있는 buffer보다 efficiency, viability에 대하여 우수하다고 판단되어집니다.
간혹, electroporation buffer가 떨어지면 급한대로 PBS를 이용하여 실험하였으나
이젠 그럴 필요가 없을듯 싶습니다.
efficiency와 cell viability가 현저하게 낮은 PBS를 사용하는것 보다 훨씬 안정적이고 기존의 buffer 보다 저렴한
Ingenio electroporation Kits & Solution을 사용하는것을 강력 추천합니다 ^0 ^
(서울 건국대학교 핵산생화학실험실)
저희 실험실 위해 항상 힘써주시는 왕친절한 김태성 담당자님 항상 감사합니다 ^- ^
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